环亚集团·AG88在生物医疗领域中的应用广泛，特别是在克隆PCR产物的纯化回收方面，以下是具体的步骤和注意事项：

一、PCR产物的纯化回收

经过PCR反应后，首先需要对产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，以确认是否存在目标大小的条带。推荐使用切胶法进行纯化，切胶时长应控制在3分钟内，以减少紫外照射对DNA的损伤。提取回收浓度时可使用NanoDrop或OneDrop等设备检测，确保浓度达到≥30ng/μl，并需再次进行电泳确认仅存在目标条带。

二、目标片段连接至载体

连接反应体系需按照说明书要求进行，各组分投入的体积应≥1μl，若浓度过高可进行稀释。连接反应温度建议为25°C或37°C，时间为5分钟；若克隆效果不理想，可尝试延长至30分钟，以减少假阳性或空载体克隆的概率。

三、感受态细胞的转化与涂板

进行连接产物转化时，推荐使用DH5α或Fast-T1等化学感受态细胞。感受态细胞应避免反复冻融，-80°C取出后建议一次性使用。重组产物与感受态细胞的体积比例为1:10，例如10μl重组产物加入至100μl感受态细胞，或5μl重组产物加入至50μl感受态细胞。热激时间应按照感受态细胞说明书操作。平板抗生素抗性需与转化载体的抗性一致，涂板时需将菌液离心（2500×g，3分钟），吸去多余的LB培养基，保留100μl重悬后的液体进行涂板。

四、单克隆菌落的PCR鉴定

在平板中挑取适中的单克隆菌落，避免选择过大或过小的菌落，进行菌落数量的挑取并进行鉴定分析。挑取的菌落放入添加了10μl ddH2O的15ml或2ml EP管中，溶解并混匀后，取1-2μl作为PCR反应（10/20μl体系）的模板。推荐使用上下游引物进行PCR鉴定，确保获得预期的结果。同时，对于存在Amp或Kana抗性的质粒，需对目标片段进行切胶回收。

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